隨著生命科學研究的突飛猛進和各門學科定量研究的快速發(fā)展，圖像分析系統(tǒng)在醫(yī)學研究中的應用越來越廣泛．并逐漸成為組織化學和免疫組織化學定量分析的主要手段。為了得到比較客觀的圖像分析結果，應該充分考慮諸多因素對圖像分析系統(tǒng)的影響，并盡可能使實驗組與對照組的處理條件保持一致，應用注意事項如下：
《一》設計在先，測試在后
這是在進行圖像分析時最容易忽視的問題。在實驗之前的設計中，要滿足有關測試所需的基本條件，如圖像的來源是否帶有偏差抽樣，放大倍數(shù)是否相等。這些圖像可能因為來源不符合圖像分析系統(tǒng)的基本原理和應用條件而存在明顯缺陷，勉強測試和分析很可能導致錯誤結果，得出錯誤結論。
《三》測試樣本的代表性
應用隨機抽樣的方法來保證測試樣本具有足夠的代表性。使用足夠的樣本數(shù)量，一定要注意到照片數(shù)或視野數(shù)并不能代替實際研究對象的例數(shù)進行統(tǒng)計學分析。
《三》實驗操作過程的一致性
用于定量分析的標本，從取材和固定開始的各項操作和每一步驟的處理應該相同。對照組與實驗組的組織塊大小與厚度應一致；切片厚度、固定方法也要一致；如用貼片法，實驗組與對照組的切片最好裱在同一載玻片上，如用漂染法，則最好在同一容器中進行處理；各種試劑的濃度、處理時間及顯色時間應盡可能一致。只有做到實驗操作的嚴格一致，對照組與實驗組之間的定量分析才有可比性。
《四》圖像分析系統(tǒng)輸入條件的一致性
在對圖像進行輸入時，應盡可能地保持各種條件一致。如利用光學顯微鏡、電子顯微鏡、數(shù)碼攝像機或數(shù)碼照相機作為輸入設備時，顯微鏡的光源電壓、光圈大小、聚光器位置、放大倍數(shù)、圖像的清晰度和攝像機或照相機的光圈、焦距等均應一致。輸入圖像過程中任何細小變化均可能導致定量結果的較大差別，特別是灰度值或光密度值等。圖像的顏色飽和度、反差和亮度的強弱也與操作者主觀意志密切相關，這就要求操作者不能帶有主觀意識操作，否則可人為地造成定量結果的誤差。
《五》圖像分析系統(tǒng)觀有參數(shù)的局限性
圖像分析系統(tǒng)中的一些常用參數(shù)，如面積、周長、長度及光密度等并非能解決所有實驗的需求，有時應根據(jù)組織結構特點，開發(fā)和引入適合于組織化學與免疫組織化學染色的新特征參數(shù)，以便全面準確地反映組織結構特點。如果多種參數(shù)聯(lián)合應用，有助于反映某一細胞或組織區(qū)別于其他細胞或組織的特征。
《六》三維定量信息的局限性
圖像分析系統(tǒng)獲得的信息為二維定量信息，不能真實地反映組織結構的三維定量特征。例如，當比較各組樣本的參照空間(包含感興趣結構的區(qū)域)體積不同時，很難根據(jù)圖像分析系統(tǒng)所得到的密度信息得出正確結論，即存在所謂的參照空間的“陷阱”問題?，F(xiàn)代體視學方法能夠獲得組織結構的三維定量特征，也能夠獲得感興趣結構的定量信息。因此，把現(xiàn)代體視學方法的原理正確應用于圖像分析系統(tǒng)的定量研究中，有利于獲得更為準確的定量信息。
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