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顯微鏡活體成像實(shí)驗(yàn)的總結(jié) 總結(jié)：熒光信號(hào)發(fā)射波長越大，成像儀越靈敏，操作手法越成熟，可以探測(cè)到的組織器官越深。 體內(nèi)成像 兩個(gè)關(guān)鍵因素：信號(hào)源、探測(cè)器（活體成像儀，包括探頭和激發(fā)光） 一、假如是轉(zhuǎn)基因方式標(biāo)記目標(biāo)，信號(hào)標(biāo)記一般是 GFP RFP HRP，直接用熒光染料標(biāo)記的QDot較多 GFP 轉(zhuǎn)染技術(shù)相對(duì)成熟，GFP基因也容易獲取；缺點(diǎn)是發(fā)出的綠光波長較短 穿透力差 特別是脊椎動(dòng)物的紅色素影響（肌紅蛋白 血紅蛋白） 成像往往很模糊 ，只能淺表成像 RFP 相對(duì)GFP優(yōu)勢(shì)明顯，波長廠，穿透力強(qiáng)，操作也不繁瑣，可以深度成像；但是，體外光源透射動(dòng)物體，得到的往往是紅光，也就是說，信號(hào)和背景往往混合，讓結(jié)果不明顯 前兩種都是熒光蛋白（綠色、紅色）優(yōu)勢(shì)是成像處理簡(jiǎn)單 ；缺點(diǎn)是成像時(shí)間不長（特別是GFP）信號(hào)隨曝光時(shí)間衰減，激發(fā)光越強(qiáng) 衰減越快。 HRP 不但波長適中，而且成像時(shí)間長，沒有信號(hào)衰減的煩惱；缺點(diǎn)是操作復(fù)雜，其顯像底物對(duì)動(dòng)物有一定的毒性（注射底物后才能發(fā)光） 熒光染料直接標(biāo)記，傳統(tǒng)的 Rhodamine、FITC 等使用很少，因?yàn)槠湫Чc熒光蛋白差別不大，同樣有衰減（據(jù)稱 Alexa Fluor系列 衰減很少） Qdot 成像操作與熒光蛋白相同，波長范圍廣，無衰減，可以多色標(biāo)記，無毒性；缺點(diǎn)是無機(jī)染料，不能伴隨實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一生，標(biāo)記操作也復(fù)雜。 總體來說，2008年元月前體內(nèi)標(biāo)記的方法就這幾種，至于近兩年有沒有新技術(shù)，不敢妄言。 二、成像儀方面 激發(fā)光源有 全波長激發(fā)和激光激發(fā)兩種：全波長可以一次性成像，但信號(hào)較弱，干擾也比較大；激光信號(hào)強(qiáng)，背景可以特征性去除，但成像較慢，多信號(hào)成像，成本偏高。 探頭一般是CCD 但是冷卻溫度不同--一般說來，溫度越低，背景信號(hào)少，可以探測(cè)若信號(hào)。也有CMOS探頭，成像效果更好，但專業(yè)CMOS價(jià)格高昂。 三、操作方法 假如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是哺乳動(dòng)物，檢測(cè)前最好褪毛處理，毛發(fā)對(duì)光的吸收很強(qiáng) 輕度麻醉，防止動(dòng)物活動(dòng)或代謝過快 檢測(cè)時(shí)間短，重復(fù)性好 。。。具體事項(xiàng)很多， 總之，活體成像各個(gè)實(shí)驗(yàn)都不一樣，成功與否取決于對(duì)整套方法的熟悉，敢于嘗試是關(guān)鍵。