熒光顯微鏡檢基本技術(shù),動(dòng)物細(xì)胞涂片檢測儀器 熒光顯微鏡檢術(shù)用于兩種基本的技術(shù),即直接FA法和間接FA法。直接法是將待檢的材料涂片固定,用含有特異抗體的結(jié)合球蛋白試劑浸漬。將浸滿試劑的涂片放在溫室內(nèi)在37℃培育30—60min。然后將涂片洗兩次,第工一次用緩沖生理鹽水洗5一lOmin。再用自來水洗5一lOmin,將沒有結(jié)合的球蛋白全部洗去。滴一滴緩沖甘油于涂片上,加蓋無熒光的蓋玻片。涂片即可用熒光顯微鏡檢查。 間接法是將涂片先用未標(biāo)記的抗血清處理,這稱為初次結(jié)合作用。操作方式與直接法完全一樣。涂片經(jīng)培育與洗滌之后,加初次反應(yīng)所用同源動(dòng)物的血清球蛋白用熒光素標(biāo)記的抗球蛋白抗體。涂片再培育和洗滌,熒光素顯示抗原與初次反應(yīng)使用未標(biāo)記特異抗體之間反應(yīng)情況。如抗原與特異抗體未發(fā)生結(jié)合,則隨后加的熒光素標(biāo)記的抗球蛋白,因沒有和特異抗體的球蛋白結(jié)合而不產(chǎn)生熒光。 間接法的優(yōu)點(diǎn)是需用標(biāo)記抗血清的量較少。如果所有診斷用抗血清都是用單獨(dú)一種動(dòng)物——例如家兔生產(chǎn)的,則僅需要熒光素標(biāo)記的抗兔球蛋白抗體。這種血清是將兔球蛋白注射另一種動(dòng)物制備的。 許多標(biāo)記的抗血清如聽裝的抗兔球蛋白抗體和未標(biāo)記的特異抗血清都已有商品出售,鑒于生產(chǎn)標(biāo)記抗血清比較復(fù)雜,而且花費(fèi)時(shí)間,可以購買成品使用。
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