細胞內(nèi)物質運輸系統(tǒng)研究用顯微鏡出售!
(一) 利用免疫染色法,了解細胞內(nèi)胞器分布的情形:
主要的原理是利用抗原和抗體之間有專一的結合特性,以及已知的標定分子,利用顯微鏡觀察蛋白質所在的位置。例如,Hochest 33258這種會與DNA結合的螢光物質,受激發(fā)后,發(fā)出藍光,因此可用來指示細胞核所在的位置。而Golgin-245這種已被研究出是位在高基氏體的蛋白質,它可以利用專一性的一級抗體辨識后,再以會激發(fā)出螢光的二級抗體結合,則由螢光訊號處得知高基氏體所在的位置。
(二) 探討蛋白質在細胞內(nèi)的分布情形:
蛋白質執(zhí)行生物功能時,如外釋作用,必須經(jīng)由蛋白質運輸系統(tǒng),將它送到特定的細胞部位,而外來的大分子也可經(jīng)由內(nèi)胞作用(請見附圖三)進入細胞。例如,以螢光標定的霍亂毒素次單元B (Cholera Toxin subunit-B;CTB-594nm) 和運鐵蛋白質 (Transferrin;Tf-488nm),各標定30分鐘后,見其被送至高基氏體處,了解細胞外的分子是透過內(nèi)胞作用由細胞膜運送至高基氏體。并利用VSVG-GFP這種病毒醣蛋白質與綠色螢光蛋白質結合的分子,在細胞內(nèi)合成后,會經(jīng)由內(nèi)質網(wǎng)運送至高基氏體,再運送至細胞膜,藉此了解外釋作用。
(三) 觀察蛋白質運輸路徑的調節(jié):
使用一種會調控囊泡運輸?shù)奶厥獾鞍踪|分子ARL1﹝它是一種小分子GTP結合蛋白酶,ADP-ribosylation factor-like蛋白質(簡稱ARL)﹞,來觀察ARL1對于VSVG-GFP以及CT-B運輸過程的調節(jié)作用。例如,若以細胞轉染的方法,讓細胞同時大量表現(xiàn)出ARL1 突變株 (ARL1QL)、VSVG-GFP,則會使VSVG-GFP無法順利送至細胞膜上,而堆積在高基氏體內(nèi)。
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